HPLC常見(jiàn)異常峰型

       上海連橋生物科技有限公司

液相色譜儀HPLC分析過(guò)程中，由于各種原因，經(jīng)常會(huì )出現一些異常峰形，嚴重影響對結果的分析，給實(shí)驗人員帶來(lái)很大的困擾。下面潤揚儀器色譜小科介紹一些常見(jiàn)的峰形以及可能的原因：

1. 未出峰    可能的原因：

a. 未成功進(jìn)樣，或樣品未溶解進(jìn)溶劑中，或樣品分解變質(zhì)或樣品濃度太低；

b. 液相色譜儀器本身的問(wèn)題：泵或者檢測器故障；

c. 流動(dòng)相選擇不合適，如對于反相硅膠柱來(lái)說(shuō)，若流動(dòng)相極性太大，是沖不下來(lái)一些小極性的物質(zhì)的，物質(zhì)一直保留在柱子中,因而不出峰；

d. 檢測器不合適，如有些產(chǎn)品沒(méi)有紫外吸收或者吸收很弱，但是檢測還使用了UV檢測器；

2.平頭峰     可能的原因：

a. 樣品濃度過(guò)大或進(jìn)樣體積太大，這個(gè)也是大多數原因；

b. 液相色譜儀檢測器設置不正確；

3.負峰     可能的原因：

a. 流動(dòng)相吸收本底值過(guò)高；

b. 進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；

c. 樣品組分的吸收低于流動(dòng)相；

d. 配制樣品的溶劑與流動(dòng)相不一致；

4.肩峰     可能的原因:

a. 進(jìn)樣量過(guò)大，樣品濃度過(guò)高；

b. 保護柱或色譜柱柱頭堵塞；

c. 保護拄或色譜柱污染或失效；

d. 色譜柱柱頭塌陷；

5.裂峰     可能的原因：

a. 溶劑效應：溶解樣品用的溶劑和起始流動(dòng)相極性相差太大；

b. 保護柱或色譜柱柱頭堵塞；

c. 保護拄或色譜柱污染或失效；

d. 色譜柱柱頭塌陷；

6.鬼峰     可能的原因：

鬼峰（ghost peak）是在某個(gè)譜圖里出現，可能同樣的條件再做一次又不出現了，時(shí)有時(shí)無(wú)的峰。

a. 進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來(lái)平衡和清洗系統；

b. 樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預處理；

c. 流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相（或者換品牌）；盡可能現配現用,隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過(guò)濾；

d. 流路中有小的氣泡，打開(kāi)Purge閥，加大流速排除；

7. 前伸峰     可能的原因：

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高；

b. 溶解樣品的溶劑比流動(dòng)相極性強；

c. 保護拄或色譜柱污染或失效；

d. 流動(dòng)相不合適，更換新流動(dòng)相（調pH或換種類(lèi)、比例等）；

8. 拖尾峰     可能的原因：

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高；

b. 流動(dòng)相不合適，更換新流動(dòng)相（調pH或換種類(lèi)、比例等）；

c. 硅羥基作用：加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值，鈍化樣品；

d. 柱內燒結不銹鋼失效：更換燒結不銹鋼，加在線(xiàn)過(guò)濾器,過(guò)濾樣品；

e. 色譜柱柱頭塌陷或柱效下降：更換色譜柱；

                        本篇轉至實(shí)驗之家