生物發(fā)光技術(shù)
                                                       上海連橋生物科技有限公司
                      原理

生物發(fā)光是生物體內一種特定酶催化，將生物化學(xué)能轉化為光能的化學(xué)發(fā)光現象。生物發(fā)光技術(shù)通過(guò)將熒光酶基因整合到預期觀(guān)察的細胞染色體DNA中以表達熒光素酶，然后培養出能穩定表達熒光素酶的細胞株。將標記好的細胞接種到實(shí)驗動(dòng)物體內后，當外源（腹腔或靜脈注射）給予其第五熒光素（luciferin），在生物體內環(huán)境中三磷酸腺苷（ATP）、O2及Mg2+存在的條件下，熒光素酶催化底物熒光素發(fā)生氧化脫羧反應，釋放可見(jiàn)光能，從而實(shí)現生物發(fā)光（偏紅色），通過(guò)電荷耦合器件（CCD）設備等生物光學(xué)成像系統進(jìn)行檢測，即生物發(fā)光活體成像技術(shù)（BLI）?；?、細胞和活體動(dòng)物都可被熒光素酶基因標記。熒光素酶在標記細胞內的表達可以直接指示細胞在體內的活動(dòng)和反應，其中ATP提供生化反應所需的能量，即該反應必須在活細胞內才會(huì )存在和產(chǎn)生發(fā)光現象，且發(fā)光強度與標記細胞的數目線(xiàn)性相關(guān)

這種無(wú)需激發(fā)就可發(fā)出的生物熒光，組織穿透能力強，靈敏度高，由于沒(méi)有激發(fā)光的非特應性干擾，信躁比較高。

應用

生物發(fā)光技術(shù)因具有*的靈敏度，便于對疾病動(dòng)物模型微小病灶進(jìn)行檢測，而且不涉及反射性有害物質(zhì)，安全系數高，實(shí)驗結果直觀(guān)，可精確定量，重現性好，操作簡(jiǎn)單，得到迅速發(fā)展。目前該技術(shù)已應用于醫療衛生、食品、環(huán)境等領(lǐng)域，尤其在抗腫瘤領(lǐng)域應用極為廣泛，實(shí)現了在活體內實(shí)時(shí)、連續地對腫瘤細胞生長(cháng)、浸潤、轉移等惡性生物學(xué)行為的檢測，也可進(jìn)行藥物選擇及個(gè)體化治療。

由于熒光素酶的活性和穩定性受很多因素影響，如緩沖液種類(lèi)、溫度、PH、金屬離子、酶濃度及發(fā)光測定時(shí)間等，尤其PH對其影響對大，在使用中需要加以注意。

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