液相流動(dòng)相稀釋劑的選擇

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稀釋劑的選擇

分析方法開(kāi)發(fā)，如何確定稀釋劑，確保方法的適用性。

1、稀釋劑的干擾

選擇稀釋劑，首先應考慮采用流動(dòng)相體系，應關(guān)注以下幾點(diǎn)：

稀釋劑不得干擾已知雜質(zhì)及主峰的檢測。

根據化合物的溶解特定，可適當加入助溶劑，但最好控制在5%以?xún)?，避免強溶劑效應?/span>

允許對照品溶液與供試品溶液配制方式有差異，但對照品所添加的助溶劑一般應控制在2%以?xún)?，必免溶劑效應產(chǎn)生不良影響（如峰型、保留時(shí)間、峰響應等與供試品有差異，導致無(wú)法準確定量）。

2、關(guān)注各雜質(zhì)及主成分的溶解度

通常有關(guān)物質(zhì)方法中主成分的濃度較大（1mg/ml~10mg/ml），若主成分在稀釋劑中的濃度接近其飽和溶解度，可能出現以下三種情況：

供試品提取不充分，導致雜質(zhì)測定結果偏低，部分未知雜質(zhì)存在無(wú)法檢出風(fēng)險。

供試品提取重現性差，導致雜質(zhì)測定結果重現性差。

樣品在檢測過(guò)程中有析出，存在影響雜質(zhì)準確定量的風(fēng)險。

因此在進(jìn)行方法摸索時(shí)，需測定相關(guān)主成分在稀釋劑中的飽和溶解度，最好滿(mǎn)足飽和溶解度大于3倍的供試品濃度。

3、關(guān)注各雜質(zhì)及主成分的穩定性

基于雜質(zhì)譜分析，配制混標，考察混標中各雜質(zhì)及主成分的穩定性。

部分雜質(zhì)峰面積明顯降低，可根據該類(lèi)型化合物的結構特點(diǎn)，調整稀釋劑的組成或注明供試品溶液的保存條件（如避光、冷藏等）。

部分雜質(zhì)峰面積明顯升高，結合主成分的結構特點(diǎn)，調整稀釋劑的組成或注明供試品溶液的保存條件（如避光、冷藏等）。

“臨用新制"，應注明時(shí)間，確保測定數據的準確性。若穩定性小于方法運行時(shí)間，個(gè)人認為是不可接受的。

4、關(guān)注溶劑效應

溶劑效應原定義為溶劑對于反應速率、平衡甚至反應機理的影響。針對于分析方法，主要指的是對溶解平衡的影響，涉及稀釋劑與流動(dòng)相、流動(dòng)相與固定相。

4.1、稀釋劑選擇不當引起的溶劑效應-現象及原理

樣品溶液的溶劑強度強于流動(dòng)相溶劑強度時(shí)可能會(huì )造成的峰展寬、峰分叉現象，其過(guò)程為當溶解樣品的溶劑不同于流動(dòng)相時(shí)，樣品溶劑與流動(dòng)相發(fā)生混合，樣品溶劑被沖稀。如果進(jìn)樣溶劑之強度高于流動(dòng)相，樣品在瞬間會(huì )表現為在較強溶劑中，并以較快速度通過(guò)色譜柱。色譜行為就是∶色譜峰的保留時(shí)間縮短。`當進(jìn)樣溶劑與流動(dòng)相混合時(shí)，一部分分子會(huì )先與流動(dòng)相混合，致使這些分子通過(guò)色譜柱的速度發(fā)生變化，使峰形扭曲，發(fā)生變形。

4.2、稀釋劑選擇不當引起的溶劑效應-如何判定

通過(guò)HPLC儀器比對一下兩個(gè)劈叉峰的紫外吸收波譜，第一就是通過(guò)HPLC儀器比對一下兩個(gè)劈叉峰的紫外吸收波譜，看看他們是否能*一樣的μV特征吸收，第二將進(jìn)樣體積調節到0.1μl看看，峰是否好轉，如果滿(mǎn)足上面兩個(gè)條件幾乎就可以肯定是100%的溶劑效應。

4.3、稀釋劑選擇不當引起的溶劑效應-如何避免降低稀釋的強度（如增加水相比例、調整pH等）或更換稀釋劑為流動(dòng)相，2、在保證檢測靈敏度的前提下，降低進(jìn)樣量。3、增加峰形前延抑制器，峰形前延抑制器的設計原理是，在色譜柱前端引入一個(gè)大小合適的空腔，使樣品到達色譜前被存留于空腔內的流動(dòng)相（色譜柱平衡時(shí)流動(dòng)相會(huì )充滿(mǎn)空腔）稀釋?zhuān)?/span>“樣品溶劑"經(jīng)稀釋后更接近流動(dòng)相的組成，實(shí)現“樣品溶劑與流動(dòng)相的組成接近"，并取代“用流動(dòng)相溶解樣品"的解決方案。

4.4、基質(zhì)效應（溶劑效應的一個(gè)變種）

基質(zhì)效應是指檢測系統檢測樣品中的分析物時(shí)，處于分析物周?chē)乃蟹欠治鑫镔|(zhì)對分析物測定的影響。產(chǎn)生基質(zhì)效應的原因與以下四個(gè)因素有關(guān)：儀器的設計、試劑的組成成分、測試方法的原理、質(zhì)控材料的組成及處理技術(shù)等，通過(guò)回收率可以評估分析方法是否受基質(zhì)效應的影響，一般若回收率普遍偏低、偏高或波動(dòng)較大，建議考慮基質(zhì)效應的影響。

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